可見分光光度計是用于檢測和跟蹤被測物質(zhì)對可見光吸光度進(jìn)行定量分析的儀器設(shè)備。

工作原理

　　溶液中的物質(zhì)受下，溶液中的物質(zhì)對光的吸收有選擇性的影響。各種不同的物質(zhì)都有自己的吸收光譜，所以當(dāng)單色光通過溶液時，它的能量會被吸收和減弱，光能的減弱程度與物質(zhì)濃度有一定的比例，即符合朗伯一比爾定律(見圖片3-10)。

　　當(dāng)液體的光程長度保持不變時，通過光根據(jù)溶液的濃度而變化?？梢?，分光光度計的基本原理是根據(jù)上述物理光學(xué)現(xiàn)象設(shè)計的。

分光光度計儀器的結(jié)構(gòu)

　　分光光度計由磁飽和穩(wěn)壓器、單色器和檢流計三部分組成。使用時，應(yīng)使用導(dǎo)線3-11接好。

　　單色器和穩(wěn)壓器的輸出接線柱5.5V或10V連接，然后根據(jù)導(dǎo)電片上套管的顏色，將單色器連接到檢流計，紅色套管的導(dǎo)電片連接到十，綠色套管的導(dǎo)電片連接到一，第三個導(dǎo)電片接地線。穩(wěn)壓器和檢流計分別連接220V電源。

光柵分光光度計的結(jié)構(gòu)

　　光柵分光光度計采用自準(zhǔn)色散系統(tǒng)和單光束結(jié)構(gòu)，色散元件為衍射光柵，波長為330~800nm數(shù)字顯示讀數(shù)也可以直接測量溶液的濃度。其形狀如圖所示3-12所示。

使用分光光度計的方法

　　(1)在連接電源之前，穩(wěn)壓器、檢流計和單色器的電源開關(guān)應(yīng)關(guān)閉。光量調(diào)節(jié)器逆時針轉(zhuǎn)向最小位置，單色器光門撥打黑點，然后連接穩(wěn)壓器和檢流計220V交流電源。

　　(2)打開檢流計電源開關(guān)，從斷開到直接或直接X1檔，指示光點出現(xiàn)在標(biāo)尺上，用零位調(diào)節(jié)器準(zhǔn)確地將光標(biāo)調(diào)整到透光標(biāo)尺的0點。

　　(3)打開穩(wěn)壓器和單色器的電源開關(guān)，將光閘撥到紅色點，然后順時針旋轉(zhuǎn)光調(diào)節(jié)器，使檢流計的指示光標(biāo)線達(dá)到標(biāo)尺上透光率的100%附近，并進(jìn)行預(yù)熱10min光標(biāo)穩(wěn)定后再使用。(4)將波長調(diào)節(jié)器調(diào)整到所需的波長。

　　(5)將單色器的光閘門撥到黑點，再次檢查檢流計的零位(即透光率為0)。

　　(6)將盛有空白溶液的比色皿放入比色皿架的第一格中，剩下的=放入待測溶液，蓋上暗箱蓋，將空白溶液推入光路(拉桿推到底)。將光閘撥到紅點，輕輕調(diào)節(jié)光量調(diào)節(jié)器，將光標(biāo)準(zhǔn)確調(diào)節(jié)到透光率100讀數(shù)。

　　(7)拔出拉桿，使有色溶液進(jìn)入光路，光標(biāo)所指A值是溶液的吸光度，然后依次測量其他溶液。

　　(8)測量完成后，取出比色皿，倒出溶液，用蒸餾水沖洗干凈，吸干，放回比色皿盒中。所有旋鈕和開關(guān)恢復(fù)到使用前狀態(tài)，切斷電源，覆蓋儀器。

注意

　　1)打開電源前，檢查每個調(diào)整旋轉(zhuǎn)問題是否在起始位置，然后打開電源開關(guān)。儀器停止工作時，必須將開關(guān)放在關(guān)閉上，然后切斷電源。

　　2)只要空白溶液的透光率能調(diào)整到100，單色器的電源電壓應(yīng)用5.5V,不用10V。這主要是為了延長光源燈的使用壽命，降低單色器的溫度。

　　3)檢流計背面有兩個電源插孔，分別標(biāo)有220V”和“6V”。若用220V交流電源時，導(dǎo)線插頭應(yīng)橋入220V孔內(nèi)，人用6V直流電源應(yīng)插入導(dǎo)線插頭6V孔內(nèi)，不要插錯。否則，儀器將被燒壞。

　　4)在儀器使用過程中，應(yīng)注意光電池的保護(hù)，長期選擇·間照而疲勞。更換溶液并記錄讀數(shù)時.將光聞門及時拔到黑點，切斷射光。

　　5)注意保護(hù)比色皿透光面的清潔度。使用時只能用手拿毛玻璃面，不要拿透光面。據(jù)擦拭外部溶液時，只能使用鏡頭紙。

　　6)比色皿盛放溶液不能超過其高度的4/5,以免溶液溢入機件內(nèi)部。

　　光柵分光光度計的使用方法

　　(1)連接電源前，檢查儀器的安全性。電源線接線應(yīng)牢固，接地線接地應(yīng)良好，各調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置應(yīng)正確，然后連接電源。

　　(2)將靈敏度派或調(diào)整到1檔(最小放6倍率)。調(diào)波長調(diào)節(jié)器至所需波長。

　　(3)打開電源開關(guān)，指示燈亮，選擇開關(guān)放在‘’T調(diào)整透光率100%旋鈕，使數(shù)字顯示100.0左右，預(yù)熱20min。

　　(4)打開吸收地暗室蓋(光門自動關(guān)閉)，調(diào)整0旋鈕，使數(shù)字顯示為000.0蓋上吸收地蓋，將參考溶液放在光路中，使光電管受光，調(diào)整透光度100%旋鈕，使數(shù)字顯示為100.0”。

　　(5)如果不顯示100，可以適當(dāng)增加電流放大器的靈敏度檔數(shù)，但應(yīng)盡量使用低檔數(shù)，使儀器穩(wěn)定性更高。改變靈敏度后，必須重新校正0和100。

　　(6)連續(xù)幾次按(4)調(diào)整00.0在100和100之后，將選擇開關(guān)放在A調(diào)整吸光度，調(diào)整零旋鈕，使數(shù)字顯示為.000”。然后將待測溶液推入光路,顯示值即為待測樣品的吸光度值A(chǔ)。

　　(7)濃度c測量。開關(guān)的選擇由A”旋至“c將標(biāo)準(zhǔn)溶液推入光路，調(diào)整濃度旋鈕。使數(shù)字顯示值為已知的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度值。將待測樣品晶體溶液推入光路，讀取待測樣品的濃度值。

　　(8)在大幅度改變測試波長時，調(diào)整00.0和100等一會兒(由于光能變化急劇，光電管受光后響應(yīng)緩慢，需要一段光響應(yīng)平衡時間)，穩(wěn)定后重新調(diào)整00·0和100一起工作。

　　注意:

　　1)使用前，用戶應(yīng)首先了解儀器的結(jié)構(gòu)和原理，以及每個旋鈕的功能。

　　2)儀器接地良好，否則顯示數(shù)字不穩(wěn)定。

　　3)儀器左下角有干操劑筒，應(yīng)保持干燥，干操劑變色后應(yīng)立即更新或干燥。

　　4)儀器停止工作時，切斷電源，同時切斷電源開關(guān)，并密封儀器。

　　以上介紹了可見分光光度計的工作原理、結(jié)構(gòu)外觀和使用方法，希望為行業(yè)相關(guān)試用人員提供一些參考。