“分光光度計(jì),又稱(chēng)光譜儀,是將成分復(fù)雜的光,分解為光譜線的科學(xué)儀器。測(cè)量范圍一般包括波長(zhǎng)范圍為380~780 nm的可見(jiàn)光區(qū)和波長(zhǎng)范圍為200~380 nm的紫外光區(qū)。不同的光源都有其特有的發(fā)射光譜,因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源。鎢燈的發(fā)射光譜:鎢燈光源所發(fā)出的380~780nm波長(zhǎng)的光譜光通過(guò)三棱鏡折射后,可得到由紅、橙、黃、綠、藍(lán)、靛、紫組成的連續(xù)色譜;該色譜可作為可見(jiàn)光分光光度計(jì)的光源。”
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分光光度計(jì)的基本工作原理是基于物質(zhì)對(duì)光(對(duì)光的波長(zhǎng))的吸收具有選擇性,不同的物質(zhì)都有各自的吸收光帶,所以,當(dāng)光色散后的光譜通過(guò)某一溶液時(shí),其中某些波長(zhǎng)的光線就會(huì)被溶液吸收。在一定的波長(zhǎng)下,溶液中物質(zhì)的濃度與光能量減弱的程度有一定的比例關(guān)系,即符合比爾定律。
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T = I/Io lg(Io/I)=εcb
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式中,T為透過(guò)率,Io為入射光強(qiáng)度,I為透射光強(qiáng)度,A為消光值(吸光度),ε為吸收系數(shù),b為溶液的光徑長(zhǎng)度,c為溶液的濃度。從以上公式可以看出,當(dāng)入射光、吸收系數(shù)和溶液厚度一定時(shí),透光率是根據(jù)溶液的濃度而變化的。
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分光光度計(jì)已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器。常用于核酸,蛋白定量以及細(xì)菌生長(zhǎng)濃度的定量。
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有區(qū)別,分光色度計(jì)與普通色差儀的主要區(qū)別在于,前者是根據(jù)其設(shè)計(jì)原理命名的。分光色度計(jì)是根據(jù)光譜反射的光譜特性,采用光譜光度分析法對(duì)產(chǎn)品顏色進(jìn)行高精度儀器Lab準(zhǔn)確測(cè)量值。其研發(fā)和生產(chǎn)與國(guó)際照明委員會(huì)完全一致(CIE)標(biāo)準(zhǔn)。此外,分光色度計(jì)還可以顯示光譜數(shù)據(jù),為被測(cè)物體的顏色提供更具體、更詳細(xì)的信息,比如準(zhǔn)確測(cè)量顏色的三刺激值XYZ,后者只能測(cè)量顏色的三刺激值L*a*b*.因此,使用分光色度計(jì)測(cè)量顏色時(shí),會(huì)得到更加準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)。
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原理相同,但是分光測(cè)色儀基本用于測(cè)量我們的可見(jiàn)光,且精度更高,操作起來(lái)更方面。
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