紫外可見分光光度計通過比較穿過樣品的光束強度與未放置樣品的參考光束的強度來提供定量測量。樣品的濃度越高，它吸收的光就越多，因此高濃度測量對應(yīng)于高吸光度值。然而，在高吸光度下，實際上很少有光到達(dá)儀器檢測器，對于許多市售的不同分光光度計來說，對這些非常低的信號水平進(jìn)行準(zhǔn)確的線性測量是非常具有挑戰(zhàn)性的。如果極低光照水平的測量不是線性的，那么儀器的高吸光度值測量將不準(zhǔn)確，不能用于可靠的定量測量。

　　吸光度和線性

　　根據(jù) Beer-Lambert 定律，吸光度 (Abs) 是樣品濃度的線性函數(shù)。盡管分光光度計實際上測量的是光的透射率。對于只有非常少量的光到達(dá)檢測器的高吸光度測量，任何影響這些低水平測量的儀器效應(yīng)都會對測量的線性度產(chǎn)生重大影響。雖然大多數(shù)分光光度計指定的可測量吸光度范圍在 0 - 4 Abs 之間，但儀器光學(xué)器件的質(zhì)量決定了低光水平下的實際性能。最重要的考慮因素是雜散光和噪聲的貢獻(xiàn)。

　　雜散光

　　雜散光是從單色儀到達(dá)檢測器的任何不直接來自測量光束的光，它會影響測量的透射光，如下所示：

　　中檔儀器的典型雜散光系數(shù)約為 0.05%T，而高端儀器在單色儀版本中的雜散光貢獻(xiàn)率約為 0.015%T。然而，具有兩個單色器的研究級儀器可提供最佳的線性吸光度范圍，雜散光低至 0.00025%T。

　　對于中檔儀器，在 3 Abs 范圍內(nèi)由雜散光引起的誤差非常顯著，并且在 4 Abs 時要高得多，這意味著定量測量應(yīng)限制在 2 Abs 及以下。對于單色儀儀器，3 Abs 處的誤差更小，這意味著它可以用于直到該點的定量測量，但不能達(dá)到 4 Abs。然而，在雙單色器版本中，誤差可以忽略不計，直至 4 Abs。

　　噪音

　　信噪比對于確定分光光度計的靈敏度至關(guān)重要。檢測系統(tǒng)內(nèi)的峰間噪聲會影響非常小信號水平的測量精度，即高吸光度。系統(tǒng)的光學(xué)設(shè)計越好，能量吞吐量就越好，這反過來又可以提供非常低的噪聲測量。噪聲被引用為峰峰值或 RMS 值。RMS 對峰峰值有平滑作用，給出明顯更低的噪聲值。然而，直接影響低信號電平測量的是峰間噪聲，因此峰間噪聲是應(yīng)始終考慮的值。噪聲值的典型示例是零吸光度時的 0.0003A 峰間值，但對于頂級儀器，噪聲測量值為 0。